本系统适合于HEK-293细胞及其它293细胞的高密度悬浮造就、、DNA瞬时转染及蛋白表白。。。

本尝试步骤凭据HEK-293细胞的锥形瓶悬浮造就经验总结而成，，也合用于其它悬浮造就方式的293细胞的DNA转染及蛋白表白。。。

转染细胞的筹备

1、、转染前需确定细胞密度及存活率。。。为确保转染成效，，建议使用成利益于指数期（密度约为2~4×10^6个/毫升）、、存活率大于98% 的细胞；
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2、、转染前细胞无需离心。。。若细胞密度为2.0×10^6个/ml时，，则可直接转染，，若细胞密度>2.0×10^6个/ml，，则需兑入新鲜的KOP293造就液，，将细胞密度稀释成2×10^6个/毫升。。？？？突б部善揪葑陨砭槊索相宜的转染密度；
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3、、细胞筹备好后恒温震荡造就10min后起头转染（5%CO2，，37℃、、120rpm）。。。

瞬时转染（以转染100ml细胞悬液为例）

1、、筹备两支15ml无菌离心管，，在其中一支中参与5ml KPM和100μg无菌质粒DNA，，轻轻奏乐混匀。。。取另一支离心管，，参与5ml KPM和500μl TA-293转染试剂，，轻轻奏乐混匀；
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2、、将含有转染试剂的离心管中所有液体转移至含质粒的离心管中，，轻轻奏乐混匀；
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3、、将质粒-载体复合物室温下静置孵育10分钟；
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4、、从恒温摇床中取出细胞，，边摇边参与制备好的质粒-载体复合物，，放回CO2恒温摇床中震荡造就。。。3小时后可凭据必要参与适量抗生素。。。

产品表白与检测

1、、转染24小时后参与600 μl 293细胞蛋白表白加强剂（KE-293），，以增长产品表白量；
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2、、可选择在转染24小时后增长一次瞬时转染营养增长剂(KT-Feed 50×)，，适当提高产品的表白量；
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3、、凭据产品个性，，在转染后第2至6天测定产品表白量；
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4、、无数重组蛋白的表白量在转染后第6天左右可达到最高值，，客户可凭据细胞状态及表白量选择合适的收成功夫。。。

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